中藥指紋圖譜在中獸藥質(zhì)量分析中應(yīng)用的探討
http://m.dcyhziu.cn 2007/6/19 源自:互聯(lián)網(wǎng) 【字體：
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中藥指紋圖譜，系指把法醫(yī)學(xué)“指紋”的概念運用于中藥質(zhì)量控制的技術(shù)，即對某種(或某產(chǎn)地)中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到能夠標(biāo)示該中藥材或中藥制劑特性的色譜或光譜的圖譜。
1 當(dāng)前常用的中藥鑒定方法及缺陷
中藥鑒定的對象非常復(fù)雜，有完整的中藥，有飲片、粉末，還有提取物、中藥成方制劑。目前常用的中藥鑒定方法有五種，即原植物鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定、生物測定。
1.1 中藥原植物鑒定
系采用生物學(xué)分類方法，確定每一種藥材的植物來源，明確其在生物界的位置。中藥材特別是植物類藥材，多以植物入藥，一般較難鑒定到種。為追究其原植物，一般需通過核對文獻(xiàn)及與經(jīng)準(zhǔn)確鑒定學(xué)名的標(biāo)本進(jìn)行比對鑒定。一味正品藥材，還必須有符合規(guī)定的化學(xué)有效成份且含量穩(wěn)定。然而，很多藥材尚無明確的有效成分，更沒有標(biāo)示的含量。其真?zhèn)蝺?yōu)劣的鑒定，僅依賴于經(jīng)驗，難以做到真正意義上的質(zhì)量控制。
1.2 中藥性狀鑒定
性狀鑒定是按藥用部位的形態(tài)、以及老藥工的經(jīng)驗進(jìn)行鑒定。中藥材以植物類為最，藥用部分一般為根、根莖、葉、花、果實、種子、皮、木、莖藤及全草類。性狀鑒定主要根據(jù)形、色、氣、味、表面特征、質(zhì)地、斷面、火燒、入水等特征，對藥材鑒定有一定作用，但大多還是憑經(jīng)驗鑒定藥材質(zhì)量，對成方制劑的鑒定意義不大。
1.3 中藥顯微鑒定
利用顯微鏡觀察藥材的內(nèi)部組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀及其后含物的特征，以鑒定藥材的真?zhèn)巍ｏ@微鑒定具有一定的專屬性，能較準(zhǔn)確地鑒定不同的藥材。對中藥成方制劑，也能通過掌握各組成藥材組織粉末的顯微特征，完成對方中部分藥材的鑒定。但顯微鑒定也存在某些藥材顯微特征類似、靠個人經(jīng)驗、復(fù)方制劑中部分藥材較難鑒定等問題，對于中藥提取制劑則無用武之地。
1.4 中藥理化鑒定
指用物理的或化學(xué)的方法，對中藥材及其制劑所含的有效成分、主成分或特征性成分進(jìn)行定性、定量分析，以鑒定真?zhèn)巍⒃u價品質(zhì)。常用的理化鑒定方法主要有定性反應(yīng)、色譜法和波譜法。
定性反應(yīng)主要是利用中藥成分中某些結(jié)構(gòu)或功能基團(tuán)與特定試劑發(fā)生反應(yīng)后，產(chǎn)生不同的顏色或沉淀的特性而進(jìn)行定性分析的方法。由于中藥成份復(fù)雜，定性反應(yīng)中假陽性的情況較多，不能真正有效地進(jìn)行鑒定。
色譜法中最常用的是薄層色譜法，是中藥鑒定中簡便、直觀、經(jīng)濟(jì)的一種色譜法，樣品點樣展開后，可直接通過斑點的熒光或顯色反應(yīng)鑒定比較，也可通過薄層掃描進(jìn)行定性、定量分析，幾乎適用于所有的動、植物類藥材的鑒定。其它如氣相色譜法、液相色譜法等具有靈敏度高、分離效率高、重現(xiàn)性好等特點，配以不同類型的檢測器，能夠?qū)Χ喾N有效成分進(jìn)行定性、定量分析，結(jié)果較準(zhǔn)確。但不是所有的有效成份都有對照品，而且對單一或若干成份的分析也不能完全反映整個制劑或藥材的質(zhì)量。
波譜法是利用中藥成分結(jié)構(gòu)的不同會產(chǎn)生特征性吸收峰而進(jìn)行鑒定的分析方法，常見的有紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、串聯(lián)質(zhì)譜、核磁共振等，但也存在同色譜法一樣的問題。
1.5 中藥生物測定
中藥生物鑒定法是利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)鑒定中藥品質(zhì)的方法，即利用生物體的反應(yīng)來測定各種藥物的療效和毒性的方法。如洋地黃，可將需鑒定的藥物與對照品在嚴(yán)格規(guī)定的條件下，比較它們對生物體所產(chǎn)生的反應(yīng)強(qiáng)度，計算出藥材或其制劑的效價。生物鑒定法具有先進(jìn)性、適用性、可操作性和專屬性強(qiáng)等特征，并且能夠突出中藥的藥效學(xué)作用，準(zhǔn)確性高。但目前此方法尚處于起步階段，在具體實施中相關(guān)方法和技術(shù)還有待于進(jìn)一步完善。
2 開展中藥指紋圖譜分析方法的必要性
中藥大部分為生物樣品，其有效成分大部分為次生代謝產(chǎn)物。即使同一品種的中藥，由于受氣候、土壤、生態(tài)環(huán)境等的影響，以及產(chǎn)地、采收季節(jié)或加工方法的不同，其化學(xué)成分有一定的區(qū)別。由于大部分中藥的有效成分尚未被闡明，因此，僅對某個有效成分或標(biāo)志性成分進(jìn)行定性、定量分析，仍不能有效控制中藥的質(zhì)量。對于中藥制劑而言，由于藥材質(zhì)量和中藥制劑生產(chǎn)工藝的不穩(wěn)定，造成中成藥質(zhì)量的不穩(wěn)定，加上目前我國對中成藥的質(zhì)量控制很不完善，復(fù)方中藥制劑基本不能定量檢測，或僅能對其中的某一有效成分進(jìn)行定量。有些人為牟取利益，用劣質(zhì)藥材配制或偷工減料，檢驗人員也很難在質(zhì)檢中發(fā)現(xiàn)。在此條件下，采用指紋圖譜控制中藥材及中藥制劑的質(zhì)量，有著十分重要的意義。
中藥指紋圖譜，系指把法醫(yī)學(xué)“指紋”的概念運用于中藥質(zhì)量控制的技術(shù)，即對某種(或某產(chǎn)地)中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到能夠標(biāo)示該中藥材或中藥制劑特性的色譜或光譜的圖譜。中藥指紋圖譜有兩個特點：一是通過指紋圖譜的特征性，能有效鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地；二是通過指紋圖譜主要特征峰的面積或比例的制定，能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保產(chǎn)品質(zhì)量的相對一致。目前，指紋圖譜已成為國際公認(rèn)的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的最有效的手段。
中藥是由許多化學(xué)物質(zhì)按照特定的比例組合而成的復(fù)雜的復(fù)方制劑。從化學(xué)角度出發(fā)，要對這一復(fù)雜制劑實行質(zhì)量控制，理論上應(yīng)完全闡明其全部化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和相對組成方式。由于中藥藥效是多種化學(xué)物質(zhì)綜合作用的結(jié)果，因此對各化學(xué)成分相對含量的闡明也非常重要。但由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性，使得這一設(shè)想在目前尚不具備可行性。不同中藥的本質(zhì)差別在于所含化學(xué)成分（主要是特征性化學(xué)成分）及其相對組合方式的不同。由于特征性化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)特殊，因此多具有某方面的生理活性，它們的整體組成往往決定了中藥的質(zhì)量。我們可以通過對植物化學(xué)成分共性和特性的分析，采用現(xiàn)代分析手段，按一定的提取分離程序去除中藥中的非特征性成分，獲取每種中藥的具有特征性的化學(xué)成分的總提取物（稱其為植物中藥特征總提物或植物中藥特征性標(biāo)準(zhǔn)提取物）。再根據(jù)不同的化合物具有不同的譜學(xué)特征，通過測定這種特征總提取物的各種色譜和光譜圖譜（這就是中藥特征性總成分的指紋圖譜）來達(dá)到表征其相對化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)等化學(xué)特征的目的。這種中藥特征總提物的色譜和光譜圖譜給出了其特征性化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)和相對組成方式等多方面的重要信息，用規(guī)范的操作程序獲得的標(biāo)準(zhǔn)樣品的指紋圖譜可以代表中藥的整體化學(xué)特征。對于中藥的質(zhì)量控制來說，如果將這種中藥特征總提取物的指紋圖譜與現(xiàn)有其它各種中藥質(zhì)控方法結(jié)合起來，綜合分析，就能更加客觀地從整體上評價中藥的內(nèi)在質(zhì)量。從中醫(yī)的整體觀念和中藥藥效來自多種化學(xué)物質(zhì)綜合作用的觀點出發(fā)，建立能反映中藥的整體化學(xué)特征和中藥多組分、多靶點、多層次特點的中藥質(zhì)量控制方法是非常必要的。
3 中藥指紋圖譜分析方法的建立
3.1 適宜的檢測方法是制定合格指紋圖譜的重要環(huán)節(jié)
從理論上講，色譜方法和光譜、波譜方法均可用于制定中藥指紋圖譜。根據(jù)經(jīng)驗，揮發(fā)性成分采用氣相色譜、非揮發(fā)性成分采用高效液相色譜檢測較易達(dá)到要求；對于一些成分簡單、在薄層色譜上分離度較好的供試品，則可采用薄層掃描。光譜中的紫外和紅外光譜提供的信息較少，同類化合物中取代基的變化難以反映出來，不能充分反映供試品成分的差異變化。如黃芪的紅外光譜顯示，不同品種、不同產(chǎn)地黃芪的紅外光譜幾乎沒有區(qū)別；大黃的紫外光譜說明，不同品種之間區(qū)別也很少。因此，建議優(yōu)先采用色譜方法制定中藥指紋圖譜。
在采用色譜方法制定中藥指紋圖譜時，要進(jìn)行嚴(yán)格的方法學(xué)考察，使中藥指紋圖譜具備特異性、重現(xiàn)性和再現(xiàn)性。在樣品處理方法方面，應(yīng)注重樣品提取方法、提取溶劑、純化方法的考察。在確定特定指紋圖譜時，至少要對10個產(chǎn)地以上不同等級的樣品或?qū)ν划a(chǎn)地的10批以上樣品進(jìn)行分析和考察，從中歸納出各批合格樣品所共有的、峰面積相對穩(wěn)定的色譜峰作為指紋峰。
3.2 中藥指紋圖譜分析方法的建立
下面以中藥材指紋圖譜檢測標(biāo)準(zhǔn)為例，說明中藥指紋圖譜的分析方法：
中藥材指紋圖譜檢測標(biāo)準(zhǔn)：包括名稱、漢語拼音、拉丁名、來源、供試品和參照物的制備、檢測方法、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)。其中：
1、來源：包括原植物、動物的科名、中文名、拉丁學(xué)名、藥用部位、產(chǎn)地、采收季節(jié)、產(chǎn)地加工、炮制方法等，礦物藥包括礦物的類、族、礦石名或巖石名、主要成分、產(chǎn)地、產(chǎn)地加工、炮制方法等。動、植物藥材均應(yīng)固定品種、藥用部位、產(chǎn)地、采收期、產(chǎn)地加工和炮制方法，礦物藥應(yīng)固定產(chǎn)地和炮制、加工方法。供試品的取樣參照《中國獸藥典》規(guī)定的中藥材取樣方法，以保證供試品的代表性和均一性。
2、供試品的制備：應(yīng)根據(jù)中藥材中所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)和檢測方法的需要，選擇適宜的方法進(jìn)行制備。制備方法必須確保該中藥材的主要化學(xué)成分在指紋圖譜中的體現(xiàn)。
3、參照物的制備：制定指紋圖譜必須設(shè)立參照物，應(yīng)根據(jù)供試品中所含成分的性質(zhì)，選擇適宜的對照品作為參照物，如果沒有適宜的對照品，可選擇適宜的內(nèi)標(biāo)物作為參照物。
4、測定方法：應(yīng)根據(jù)中藥材所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，選擇適宜的測定方法，建議優(yōu)先考慮色譜方法。對于成分復(fù)雜的中藥材，必要時可以考慮采用多種測定方法，建立多張指紋圖譜。以色譜方法制定指紋圖譜所采用的色譜柱、薄層板、試劑、測定條件等必須固定；以光譜方法制定指紋圖譜，相應(yīng)的測定條件也必須固定。
檢測方法的建立必須進(jìn)行穩(wěn)定性試驗、精密度試驗、重現(xiàn)性試驗。
5、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)
A、指紋圖譜：根據(jù)供試品的檢測結(jié)果，建立指紋圖譜。采用高效液相色譜法和氣相色譜法制定指紋圖譜，其指紋圖譜的記錄時間一般為1小時；采用薄層掃描法制定指紋圖譜，必須提供從原點至溶劑前沿的圖譜；采用光譜方法制定指紋圖譜，必須按各種光譜的相應(yīng)規(guī)定提供全譜。對于化學(xué)成分類型復(fù)雜的品種，必要時可建立多張指紋圖譜。根據(jù)10批次以上供試品的檢測結(jié)果所給出的相關(guān)參數(shù)，制定指紋圖譜。
B、共有指紋峰的標(biāo)定：采用色譜方法制定指紋圖譜，必須根據(jù)參照物的保留時間，計算指紋峰的相對保留時間。根據(jù)10批次以上供試品的檢測結(jié)果，標(biāo)定中藥材的共有指紋峰。色譜法采用相對保留時間標(biāo)定指紋峰，光譜法采用波長或波數(shù)標(biāo)定指紋峰。
C、共有指紋峰面積的比值：以對照品作為參照物的指紋圖譜，以參照物峰面積作為1，計算各共有指紋峰面積與參照物峰面積的比值；以內(nèi)標(biāo)物作為參照物的指紋圖譜，則以共有指紋峰中其中一個峰（要求峰面積相對較大、較穩(wěn)定的共有峰）的峰面積作為1，計算其它各共有指紋峰面積的比值。各共有指紋峰的面積比值必須相對固定。
D、非共有峰面積：中藥材供試品的圖譜與指紋圖譜比較，非共有峰總面積不得大于總峰面積的10%。
4 總結(jié)
4.1 到目前為止，在中藥生產(chǎn)和流通領(lǐng)域，還沒有一種質(zhì)量控制手段能夠全面的、綜合地反映出中藥產(chǎn)品的質(zhì)量變異，有效地進(jìn)行全過程的質(zhì)量控制。中藥指紋圖譜的研究和建立正是為了解決藥品質(zhì)量控制和監(jiān)督的這一關(guān)鍵問題而采取的一種方法。它從藥材的生產(chǎn)、粗加工、貯存，制劑的原料、中間品、成品、流通等各個角度和方面，進(jìn)行中藥樣品的理化分析，通過相似性和相關(guān)性對比，發(fā)現(xiàn)質(zhì)量變異和缺陷，從而全面、特異地把握住中藥的質(zhì)量命脈。
4.2 中藥指紋圖譜為中藥新藥研究帶來了一種嶄新的模式，它既充分吸收中醫(yī)用藥理論精華，又蘊(yùn)含現(xiàn)代藥物活性特征，為新藥產(chǎn)生和快速篩選提供了思路和方法。它系通過尋找有效部位或有效組分的圖譜與活性效應(yīng)之間的組效學(xué)特征來指導(dǎo)新藥研究和篩選，研究的是一個活性成分群的整體特性，而并不僅限于某個或幾個成分，因而不同于西藥研究中的藥物構(gòu)效關(guān)系；另一方面，中藥指紋圖譜也不同于譜效關(guān)系。
4.3 中藥指紋圖譜具有整體、宏觀和模糊分析等特點，特別適應(yīng)于中醫(yī)藥傳統(tǒng)理論的需要。從中藥物質(zhì)基礎(chǔ)的角度出發(fā)，運用現(xiàn)代分離分析科學(xué)的手段，獲取中藥化學(xué)指紋圖譜；結(jié)合藥效研究和相關(guān)物質(zhì)成分的分離鑒定，通過組效關(guān)系研究，獲取中藥有效組分指紋圖譜。進(jìn)而將中藥化學(xué)指紋圖譜和中藥有效組分指紋圖譜用于中藥材、中間體和中獸藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制，以及新中獸藥制劑的研制等實踐。最終科學(xué)地解決中獸藥質(zhì)量評價及中藥質(zhì)量控制的關(guān)鍵問題，為加快推進(jìn)中獸藥的發(fā)展、促進(jìn)中獸藥走出國門打下堅實的基礎(chǔ)。
1 當(dāng)前常用的中藥鑒定方法及缺陷
中藥鑒定的對象非常復(fù)雜，有完整的中藥，有飲片、粉末，還有提取物、中藥成方制劑。目前常用的中藥鑒定方法有五種，即原植物鑒定、性狀鑒定、顯微鑒定、理化鑒定、生物測定。
1.1 中藥原植物鑒定
系采用生物學(xué)分類方法，確定每一種藥材的植物來源，明確其在生物界的位置。中藥材特別是植物類藥材，多以植物入藥，一般較難鑒定到種。為追究其原植物，一般需通過核對文獻(xiàn)及與經(jīng)準(zhǔn)確鑒定學(xué)名的標(biāo)本進(jìn)行比對鑒定。一味正品藥材，還必須有符合規(guī)定的化學(xué)有效成份且含量穩(wěn)定。然而，很多藥材尚無明確的有效成分，更沒有標(biāo)示的含量。其真?zhèn)蝺?yōu)劣的鑒定，僅依賴于經(jīng)驗，難以做到真正意義上的質(zhì)量控制。
1.2 中藥性狀鑒定
性狀鑒定是按藥用部位的形態(tài)、以及老藥工的經(jīng)驗進(jìn)行鑒定。中藥材以植物類為最，藥用部分一般為根、根莖、葉、花、果實、種子、皮、木、莖藤及全草類。性狀鑒定主要根據(jù)形、色、氣、味、表面特征、質(zhì)地、斷面、火燒、入水等特征，對藥材鑒定有一定作用，但大多還是憑經(jīng)驗鑒定藥材質(zhì)量，對成方制劑的鑒定意義不大。
1.3 中藥顯微鑒定
利用顯微鏡觀察藥材的內(nèi)部組織構(gòu)造、細(xì)胞形狀及其后含物的特征，以鑒定藥材的真?zhèn)巍ｏ@微鑒定具有一定的專屬性，能較準(zhǔn)確地鑒定不同的藥材。對中藥成方制劑，也能通過掌握各組成藥材組織粉末的顯微特征，完成對方中部分藥材的鑒定。但顯微鑒定也存在某些藥材顯微特征類似、靠個人經(jīng)驗、復(fù)方制劑中部分藥材較難鑒定等問題，對于中藥提取制劑則無用武之地。
1.4 中藥理化鑒定
指用物理的或化學(xué)的方法，對中藥材及其制劑所含的有效成分、主成分或特征性成分進(jìn)行定性、定量分析，以鑒定真?zhèn)巍⒃u價品質(zhì)。常用的理化鑒定方法主要有定性反應(yīng)、色譜法和波譜法。
定性反應(yīng)主要是利用中藥成分中某些結(jié)構(gòu)或功能基團(tuán)與特定試劑發(fā)生反應(yīng)后，產(chǎn)生不同的顏色或沉淀的特性而進(jìn)行定性分析的方法。由于中藥成份復(fù)雜，定性反應(yīng)中假陽性的情況較多，不能真正有效地進(jìn)行鑒定。
色譜法中最常用的是薄層色譜法，是中藥鑒定中簡便、直觀、經(jīng)濟(jì)的一種色譜法，樣品點樣展開后，可直接通過斑點的熒光或顯色反應(yīng)鑒定比較，也可通過薄層掃描進(jìn)行定性、定量分析，幾乎適用于所有的動、植物類藥材的鑒定。其它如氣相色譜法、液相色譜法等具有靈敏度高、分離效率高、重現(xiàn)性好等特點，配以不同類型的檢測器，能夠?qū)Χ喾N有效成分進(jìn)行定性、定量分析，結(jié)果較準(zhǔn)確。但不是所有的有效成份都有對照品，而且對單一或若干成份的分析也不能完全反映整個制劑或藥材的質(zhì)量。
波譜法是利用中藥成分結(jié)構(gòu)的不同會產(chǎn)生特征性吸收峰而進(jìn)行鑒定的分析方法，常見的有紫外-可見分光光度法、紅外分光光度法、串聯(lián)質(zhì)譜、核磁共振等，但也存在同色譜法一樣的問題。
1.5 中藥生物測定
中藥生物鑒定法是利用藥效學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)鑒定中藥品質(zhì)的方法，即利用生物體的反應(yīng)來測定各種藥物的療效和毒性的方法。如洋地黃，可將需鑒定的藥物與對照品在嚴(yán)格規(guī)定的條件下，比較它們對生物體所產(chǎn)生的反應(yīng)強(qiáng)度，計算出藥材或其制劑的效價。生物鑒定法具有先進(jìn)性、適用性、可操作性和專屬性強(qiáng)等特征，并且能夠突出中藥的藥效學(xué)作用，準(zhǔn)確性高。但目前此方法尚處于起步階段，在具體實施中相關(guān)方法和技術(shù)還有待于進(jìn)一步完善。
2 開展中藥指紋圖譜分析方法的必要性
中藥大部分為生物樣品，其有效成分大部分為次生代謝產(chǎn)物。即使同一品種的中藥，由于受氣候、土壤、生態(tài)環(huán)境等的影響，以及產(chǎn)地、采收季節(jié)或加工方法的不同，其化學(xué)成分有一定的區(qū)別。由于大部分中藥的有效成分尚未被闡明，因此，僅對某個有效成分或標(biāo)志性成分進(jìn)行定性、定量分析，仍不能有效控制中藥的質(zhì)量。對于中藥制劑而言，由于藥材質(zhì)量和中藥制劑生產(chǎn)工藝的不穩(wěn)定，造成中成藥質(zhì)量的不穩(wěn)定，加上目前我國對中成藥的質(zhì)量控制很不完善，復(fù)方中藥制劑基本不能定量檢測，或僅能對其中的某一有效成分進(jìn)行定量。有些人為牟取利益，用劣質(zhì)藥材配制或偷工減料，檢驗人員也很難在質(zhì)檢中發(fā)現(xiàn)。在此條件下，采用指紋圖譜控制中藥材及中藥制劑的質(zhì)量，有著十分重要的意義。
中藥指紋圖譜，系指把法醫(yī)學(xué)“指紋”的概念運用于中藥質(zhì)量控制的技術(shù)，即對某種(或某產(chǎn)地)中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分析手段，得到能夠標(biāo)示該中藥材或中藥制劑特性的色譜或光譜的圖譜。中藥指紋圖譜有兩個特點：一是通過指紋圖譜的特征性，能有效鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地；二是通過指紋圖譜主要特征峰的面積或比例的制定，能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保產(chǎn)品質(zhì)量的相對一致。目前，指紋圖譜已成為國際公認(rèn)的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的最有效的手段。
中藥是由許多化學(xué)物質(zhì)按照特定的比例組合而成的復(fù)雜的復(fù)方制劑。從化學(xué)角度出發(fā)，要對這一復(fù)雜制劑實行質(zhì)量控制，理論上應(yīng)完全闡明其全部化學(xué)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和相對組成方式。由于中藥藥效是多種化學(xué)物質(zhì)綜合作用的結(jié)果，因此對各化學(xué)成分相對含量的闡明也非常重要。但由于中藥化學(xué)成分的復(fù)雜性，使得這一設(shè)想在目前尚不具備可行性。不同中藥的本質(zhì)差別在于所含化學(xué)成分（主要是特征性化學(xué)成分）及其相對組合方式的不同。由于特征性化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)特殊，因此多具有某方面的生理活性，它們的整體組成往往決定了中藥的質(zhì)量。我們可以通過對植物化學(xué)成分共性和特性的分析，采用現(xiàn)代分析手段，按一定的提取分離程序去除中藥中的非特征性成分，獲取每種中藥的具有特征性的化學(xué)成分的總提取物（稱其為植物中藥特征總提物或植物中藥特征性標(biāo)準(zhǔn)提取物）。再根據(jù)不同的化合物具有不同的譜學(xué)特征，通過測定這種特征總提取物的各種色譜和光譜圖譜（這就是中藥特征性總成分的指紋圖譜）來達(dá)到表征其相對化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)等化學(xué)特征的目的。這種中藥特征總提物的色譜和光譜圖譜給出了其特征性化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)和相對組成方式等多方面的重要信息，用規(guī)范的操作程序獲得的標(biāo)準(zhǔn)樣品的指紋圖譜可以代表中藥的整體化學(xué)特征。對于中藥的質(zhì)量控制來說，如果將這種中藥特征總提取物的指紋圖譜與現(xiàn)有其它各種中藥質(zhì)控方法結(jié)合起來，綜合分析，就能更加客觀地從整體上評價中藥的內(nèi)在質(zhì)量。從中醫(yī)的整體觀念和中藥藥效來自多種化學(xué)物質(zhì)綜合作用的觀點出發(fā)，建立能反映中藥的整體化學(xué)特征和中藥多組分、多靶點、多層次特點的中藥質(zhì)量控制方法是非常必要的。
3 中藥指紋圖譜分析方法的建立
3.1 適宜的檢測方法是制定合格指紋圖譜的重要環(huán)節(jié)
從理論上講，色譜方法和光譜、波譜方法均可用于制定中藥指紋圖譜。根據(jù)經(jīng)驗，揮發(fā)性成分采用氣相色譜、非揮發(fā)性成分采用高效液相色譜檢測較易達(dá)到要求；對于一些成分簡單、在薄層色譜上分離度較好的供試品，則可采用薄層掃描。光譜中的紫外和紅外光譜提供的信息較少，同類化合物中取代基的變化難以反映出來，不能充分反映供試品成分的差異變化。如黃芪的紅外光譜顯示，不同品種、不同產(chǎn)地黃芪的紅外光譜幾乎沒有區(qū)別；大黃的紫外光譜說明，不同品種之間區(qū)別也很少。因此，建議優(yōu)先采用色譜方法制定中藥指紋圖譜。
在采用色譜方法制定中藥指紋圖譜時，要進(jìn)行嚴(yán)格的方法學(xué)考察，使中藥指紋圖譜具備特異性、重現(xiàn)性和再現(xiàn)性。在樣品處理方法方面，應(yīng)注重樣品提取方法、提取溶劑、純化方法的考察。在確定特定指紋圖譜時，至少要對10個產(chǎn)地以上不同等級的樣品或?qū)ν划a(chǎn)地的10批以上樣品進(jìn)行分析和考察，從中歸納出各批合格樣品所共有的、峰面積相對穩(wěn)定的色譜峰作為指紋峰。
3.2 中藥指紋圖譜分析方法的建立
下面以中藥材指紋圖譜檢測標(biāo)準(zhǔn)為例，說明中藥指紋圖譜的分析方法：
中藥材指紋圖譜檢測標(biāo)準(zhǔn)：包括名稱、漢語拼音、拉丁名、來源、供試品和參照物的制備、檢測方法、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)。其中：
1、來源：包括原植物、動物的科名、中文名、拉丁學(xué)名、藥用部位、產(chǎn)地、采收季節(jié)、產(chǎn)地加工、炮制方法等，礦物藥包括礦物的類、族、礦石名或巖石名、主要成分、產(chǎn)地、產(chǎn)地加工、炮制方法等。動、植物藥材均應(yīng)固定品種、藥用部位、產(chǎn)地、采收期、產(chǎn)地加工和炮制方法，礦物藥應(yīng)固定產(chǎn)地和炮制、加工方法。供試品的取樣參照《中國獸藥典》規(guī)定的中藥材取樣方法，以保證供試品的代表性和均一性。
2、供試品的制備：應(yīng)根據(jù)中藥材中所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)和檢測方法的需要，選擇適宜的方法進(jìn)行制備。制備方法必須確保該中藥材的主要化學(xué)成分在指紋圖譜中的體現(xiàn)。
3、參照物的制備：制定指紋圖譜必須設(shè)立參照物，應(yīng)根據(jù)供試品中所含成分的性質(zhì)，選擇適宜的對照品作為參照物，如果沒有適宜的對照品，可選擇適宜的內(nèi)標(biāo)物作為參照物。
4、測定方法：應(yīng)根據(jù)中藥材所含化學(xué)成分的理化性質(zhì)，選擇適宜的測定方法，建議優(yōu)先考慮色譜方法。對于成分復(fù)雜的中藥材，必要時可以考慮采用多種測定方法，建立多張指紋圖譜。以色譜方法制定指紋圖譜所采用的色譜柱、薄層板、試劑、測定條件等必須固定；以光譜方法制定指紋圖譜，相應(yīng)的測定條件也必須固定。
檢測方法的建立必須進(jìn)行穩(wěn)定性試驗、精密度試驗、重現(xiàn)性試驗。
5、指紋圖譜及技術(shù)參數(shù)
A、指紋圖譜：根據(jù)供試品的檢測結(jié)果，建立指紋圖譜。采用高效液相色譜法和氣相色譜法制定指紋圖譜，其指紋圖譜的記錄時間一般為1小時；采用薄層掃描法制定指紋圖譜，必須提供從原點至溶劑前沿的圖譜；采用光譜方法制定指紋圖譜，必須按各種光譜的相應(yīng)規(guī)定提供全譜。對于化學(xué)成分類型復(fù)雜的品種，必要時可建立多張指紋圖譜。根據(jù)10批次以上供試品的檢測結(jié)果所給出的相關(guān)參數(shù)，制定指紋圖譜。
B、共有指紋峰的標(biāo)定：采用色譜方法制定指紋圖譜，必須根據(jù)參照物的保留時間，計算指紋峰的相對保留時間。根據(jù)10批次以上供試品的檢測結(jié)果，標(biāo)定中藥材的共有指紋峰。色譜法采用相對保留時間標(biāo)定指紋峰，光譜法采用波長或波數(shù)標(biāo)定指紋峰。
C、共有指紋峰面積的比值：以對照品作為參照物的指紋圖譜，以參照物峰面積作為1，計算各共有指紋峰面積與參照物峰面積的比值；以內(nèi)標(biāo)物作為參照物的指紋圖譜，則以共有指紋峰中其中一個峰（要求峰面積相對較大、較穩(wěn)定的共有峰）的峰面積作為1，計算其它各共有指紋峰面積的比值。各共有指紋峰的面積比值必須相對固定。
D、非共有峰面積：中藥材供試品的圖譜與指紋圖譜比較，非共有峰總面積不得大于總峰面積的10%。
4 總結(jié)
4.1 到目前為止，在中藥生產(chǎn)和流通領(lǐng)域，還沒有一種質(zhì)量控制手段能夠全面的、綜合地反映出中藥產(chǎn)品的質(zhì)量變異，有效地進(jìn)行全過程的質(zhì)量控制。中藥指紋圖譜的研究和建立正是為了解決藥品質(zhì)量控制和監(jiān)督的這一關(guān)鍵問題而采取的一種方法。它從藥材的生產(chǎn)、粗加工、貯存，制劑的原料、中間品、成品、流通等各個角度和方面，進(jìn)行中藥樣品的理化分析，通過相似性和相關(guān)性對比，發(fā)現(xiàn)質(zhì)量變異和缺陷，從而全面、特異地把握住中藥的質(zhì)量命脈。
4.2 中藥指紋圖譜為中藥新藥研究帶來了一種嶄新的模式，它既充分吸收中醫(yī)用藥理論精華，又蘊(yùn)含現(xiàn)代藥物活性特征，為新藥產(chǎn)生和快速篩選提供了思路和方法。它系通過尋找有效部位或有效組分的圖譜與活性效應(yīng)之間的組效學(xué)特征來指導(dǎo)新藥研究和篩選，研究的是一個活性成分群的整體特性，而并不僅限于某個或幾個成分，因而不同于西藥研究中的藥物構(gòu)效關(guān)系；另一方面，中藥指紋圖譜也不同于譜效關(guān)系。
4.3 中藥指紋圖譜具有整體、宏觀和模糊分析等特點，特別適應(yīng)于中醫(yī)藥傳統(tǒng)理論的需要。從中藥物質(zhì)基礎(chǔ)的角度出發(fā)，運用現(xiàn)代分離分析科學(xué)的手段，獲取中藥化學(xué)指紋圖譜；結(jié)合藥效研究和相關(guān)物質(zhì)成分的分離鑒定，通過組效關(guān)系研究，獲取中藥有效組分指紋圖譜。進(jìn)而將中藥化學(xué)指紋圖譜和中藥有效組分指紋圖譜用于中藥材、中間體和中獸藥復(fù)方制劑的質(zhì)量控制，以及新中獸藥制劑的研制等實踐。最終科學(xué)地解決中獸藥質(zhì)量評價及中藥質(zhì)量控制的關(guān)鍵問題，為加快推進(jìn)中獸藥的發(fā)展、促進(jìn)中獸藥走出國門打下堅實的基礎(chǔ)。
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